можно ли, наблюдая взаимное отталкивание двух шаров, однозначно утверждать, что они заряжены положительно?

Нельзя, т. к. заряд может быть заряжен и отрицательно. (По правилу отталкиваются одноименные заряды, т. е. + и + или - и - ) Однозначно можно сказать то, что эти заряды одного знака.